Question

En los primeros ciclos de la PCR, el producto del amplificado no es propiamente del tamaño que los iniciadores flanquean. Explique a qué se debe la anterior afirmación. (Me ayudarian mucho si me explicaran que es falquear, entinedo el funcionamiento general de la PCR pero no esta afirmación)

Answer 1

En la Reacción de Cadena de Polimerasa, ó PCR, se realiza una amplificación y duplicación de la cadena de ADN con la finalidad de identificar con precisión a qué organimo vivo pertenece dicha secuencia. Este proceso requere del uso de dispositivos denominados termocicladores, que serán los que provean la temperatura de reacción y el desarrollo del proceso fuera de la célula.

El proceso de PCR consta básicamente de tres fases importantes: a) la desnaturalización de la molécula original, esto es, el desenrrollamiento de la cadena de ADN; b)la iniciación del proceso mediante la intervención de fragmentos cebadores; c) la ampliación de la cadena de ADN neoformada por acción de enzimas polimerasas.

En la fase de iniciación actuan un par de cebadores, iniciadores o primers, cada uno a cada lado del fragmento de ADN original que se amplificará (es decir, los cebadores estarán a cada lado del fragmento, lo que significa flanquear el fragmento), lo que permitirá iniciar la secuenciación de una nueva cadena a partir del segmento que se encuentra entre los dos cebadores.

En la PCR el proceso de iniciación es termodependiente, es decir, requiere una determinada temperatura (45° a 65° C) para ocurrir, además de un espacio de tiempo determinado. Cuando la temperatura no es óptima, o el termociclador no emplea el tiempo necesario, el fragmento de ADN obtenido no será igual al flanqueado por los cebadores, sino de menor tamaño. Esto no impide la amplificación del fragmento, ya que al obtenerse la primera secuencia de nucleótidos por parte de los iniciadores, las polimerasas extenderán la cadena con la respectiva secuencia de nucleótidos.