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Análisis Inmunoelectroforético
En esta técnica se utilizan simultáneamente tres técnicas; por un lado separación por electroforesis, difusión y precipitación de proteínas, esto le confiere a la técnica una gran sensibilidad, permitiendo el estudio de muestras complejas como sueros o muestras de orina.
La inmunoelectroforésis se lleva a cabo sobre un soporte sólido el cual no interfiera con la corrida de las proteínas, estas migran en la electroforesis por su carga neta. Se siembra la muestra a analizar en un reservorio en la placa y en un canal paralelo a la dirección de migración se siembra el inmunosuero especifico para el antígeno de interés, se los deja correr y luego pueden visualizarse las bandas de precipitación.
La especificidad y sensibilidad de las reacciones de precipitación permiten distinguir sustancias de movilidades electroforéticas idénticas dado que cada antígeno reacciona separadamente con su anticuerpo homólogo dando un arco independiente.
ObjetivosAplicar las técnicas Inmunodifusión Doble de Ouchterlony e Inmunoelectroforesis, con el fin de estudiar la interacción Antígeno-Anticuerpo.Materiales y Métodos
Inmunodifusión Doble de Ouchterlony
Se partió de placas de petri, las cuales contenían una capa de gel de agarosa 1% ya solidificado, y se le realizaron pocillos con una pipeta pasteur devidrio; en estos posillos se realizo la siembra de las muestras.
Se sembró en el posillo del centro suero total de conejo anti-humano, y en los pocillos laterales:
1 suero humano 1/50
2 precipitado de sulfato de amonio 33% 1/20
3 precipitado de sulfato de amonio 50% 1/20
4 purificación por proteína A fracción 3 1/20
5 purificación por proteína A fracción 4 1/20