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Comenzó a principios del siglo XVI con la fundación del puerto y casa fuerte, que sería Asunción del Paraguay, el 15 de agosto de 1537 por Juan de Salazar de Espinosa, hasta las últimas fundaciones en el primer cuarto del siglo XVII. La ciudad, finalmente, se convirtió en la cabecera de una provincia colonial española, a la que se llegó a conocer como...«Madre de Ciudades», ya que de ella partieron las corrientes pobladoras y repobladoras de diversas ciudades de la zona. En la región hubo fundaciones anteriores, como la del primer fuerte Nuestra Señora del Buen Aire, por don Pedro de Mendoza, el 2 de febrero de 1536; ese mismo año se fundó Corpus Cristhi para sustituir el abandonado Sancti Spiritus (1527); seguido de otras fundaciones, como Buena Esperanza y Candelaria.