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El gaucho Martín Fierro es llevado por el gobierno a la fuerza para integrar las milicias y luchar contra los indios, cuando vuelve ha perdido a su familia y su rancho. La pena lo lleva a volverse "gaucho matrero", es decir fuera de la ley.
Martín Fierro es una película animada de acción y aventuras basada en ''El Gaucho Martín Fierro'' de José Hernández, la obra más importante de la literatura argentina.
Es la historia de un héroe trágico, uno de los miles de gauchos que fueron reclutados para pelear contra los indios en la frontera argentina de la Patagonia en la segunda mitad del siglo XIX.
Martín Fierro es separado de su familia y enviado a la frontera, donde debe servir a los intereses del ejército y, la mayoría de las veces, a los intereses particulares de los hombres que dirigen ese ejército y que se aprovechan de la situación para obtener ventajas personales y quedarse con tierras y haciendas.
Fierro huye para regresar a su tierra, junto a su familia; pero, cuando por fin llega, descubre que le han arrebatado ambas cosas y que se ha convertido en un desertor. Ahora, su destino es huir de la justicia.
Más tarde que temprano, Fierro comprende que no podrá recuperar lo perdido y que sólo le queda la búsqueda de la libertad.