2) Si la secuencia de la cadena de ADN es CGT-AAT, la complementariedad de la
cadena de ARN será:
Respuestas
Respuesta:
El ARN es el ácido nucleico más abundante en la célula. Lo sintetiza la enzima ARN
polimerasa a partir de una molécula de ADN mediante un proceso denominado
transcripción. La ARN polimerasa sintetiza el ARN en dirección 5'→3', de modo que
la hebra de ADN que actúa como molde está orientada en sentido 3'→5', por lo que
también se la conoce como hebra sin sentido (antisense), hebra no codificante
(noncoding) o hebra (─)
Explicación:
La hebra de ADN complementaria a la que actúa como molde presenta la misma
secuencia que el transcrito de ARN (aunque, lógicamente, contiene T en lugar de U) y
se la conoce como hebra con sentido (sense), hebra codificante (coding) o hebra (+).
Los genes pueden estar en cualquiera de las dos hebras del ADN, así que una misma
hebra será codificante en algunos casos y no codificante en otros. A veces se pueden
encontrar regiones del ADN donde cada hebra codifica un gen distinto. Estas regiones
de solapamiento (coloreadas en la figura inferior) son problemáticas porque suelen
confundir a los programas que buscan genes de forma automática.
Cuando se va a depositar la secuencia de un gen en una base de datos, se
envía siempre la secuencia de la hebra codificante. .- Secuenciación química del ARN
En 1965 se secuenció el primer ARN: el Ala-RNAt, formado por 77 nucleótidos. Se
utilizaron métodos similares a los que se emplearon en el caso de las proteínas:
hidrólisis parcial mediante enzimas, fraccionamiento de los productos en una columna
de intercambio iónico y análisis químico. Las enzimas utilizadas fueron la ribonucleasa
pancreática, que rompe el ARN tras una base pirimidínica (C y U) y la ribonucleasa T1,
que escinde la molécula de ARN después de una G o una I (inosina).
Poco después, Fred Sanger desarrolló un método basado en la hidrólisis enzimática y la
posterior separación y análisis de los oligonucleótidos generados (marcados con 32P)
mediante cromatografía bidimensional en papel. De este modo, en 1968, consiguió
secuenciar el ARNr de 5S, que tiene una longitud de 120 nucleótidos.
Este tipo de secuenciación del ARN puede complicarse debido a la presencia de
nucleótidos atípicos o modificados en el ARNt y en el ARNr. Hoy en día, la presencia
de nucleótidos modificados se puede detectar con relativa facilidad gracias a la
espectrometría de masas.
2.- Secuenciación del ARN a partir del ADNc (EST, RNA-Seq)
Si el ARN carece de nucleótidos atípicos o modificados, su secuencia se puede
determinar directamente a partir de la secuencia de ADN genómico (ADNg) que lo
codifica. En eucariotas, sin embargo, es muy habitual que la secuencia de las
moléculas de ARNm que van a ser traducidas no coincida exactamente con la secuencia
del ADN genómico, ya que los transcritos primarios de ARN pueden experimentar
diversas modificaciones mediante los procesos de maduración del ARN (RNA
splicing) o edición del ARN (RNA editing). Durante la maduración del ARN se
eliminan los intrones del transcrito primario y se empalman los exones para generar un
ARNm maduro. La edición del ARN es un proceso en el que se pueden añadir, eliminar
o sustituir nucleótidos en la secuencia del ARN. En estos casos, la secuencia del ARNm
se puede obtener directamente a partir del ADN complementario (ADNc), que es una
molécula de ADN sintetizada por la enzima transcriptasa inversa a partir de una
molécula de ARNm que actúa como molde. Obviamente, la secuencia del ADNc no
coincidirá con la del ADNg.
Generación de ADNc a partir de moléculas de ARNm
En primer lugar, se extrae todo el ARN celular y se hace pasar a través de una columna
de celulosa unida a cadenas de oligo(dT). Las colas de poli(A) de las moléculas de
ARNm quedan retenidas en la columna, mientras que el resto del ARN la atraviesa. A
continuación se utiliza un tampón de elución que rompe los puentes de hidrógeno entre
la cola de poli(A) y las cadenas de oligo(dT) y permite extraer el ARNm de la columna.
Este ARNm servirá de molde para que la transcriptasa inversa sintetice una hebra de
ADNc utilizando como cebadores oligo(dT), que hibridan con la cola de poli(A). La
transcriptasa inversa genera una molécula híbrida ADN/ARN. Esta molécula se trata
brevemente con una ribonucleasa que digiere parcialmente la hebra de ARN (algunas
transcriptasas inversas tienen actividad ribonucleasa H que, durante el proceso de