Question

Si se omite un paso específico en la tinción Gram, todavía podría diferenciarse entre las bacterias Gram-positivas y las bacterias Gram-negativas.

Answer 1

Los procedimientos de tinción de Gram  inician con la aplicación de un colorante básico, violeta de genciana. A continuación se aplica una solución de yodo; todas las bacterias se tiñen de color azul en este punto del procedimiento. Luego la célula se trata con alcohol. Las células grampositivas que conservan el complejo de violeta de genciana-yodo adquieren un color azul y las células gramnegativas se decoloran por completo con la adición de alcohol. Como último paso se aplica otro colorante (como rojo de safranina) de forma que las células gram negativas decoloradas adquieran un color contrastante; las células grampositivas adquieren un color violáceo

La tinción de Gram depende de la capacidad de ciertas bacterias (grampositivas) para retener un, complejo de cristales de color violeta (un colorante de color violáceo) además de yodo después de un breve lavado con alcohol o acetona. Las bacterias gramnegativas no retienen el complejo de colorante-yodo y se vuelven translúcidas, pero pueden volverse a teñir con safranina (un colorante de color rojo). Así, las bacterias grampositivas adquieren un aspecto violáceo bajo el microscopio, en tanto que las bacterias gramnegativas se ven de color rojo. La diferenciación entre estos dos grupos refleja diferencias fundamentales en sus envolturas celulares. 

En conclusión, puedes omitir el último paso, el de agregar safranina, ya que ya de por sí las bacterias gram negativo las vas a observar transparentes, la safranina solamente la utilizas para que te sea más fácil diferenciarlas (y más para un ojo inexperto) pero una persona experta y con años de experiencia, puede saltarse ese paso. 

Answer 2

Se debe conocer en que cosiste la tinción Gram, utilizada en los laboratorios de microbiologia para la puesta en evidencia de la presencia de bacterias en muestras biológicas o no biológicas.

¿Que es la Tinción de Gram?

Esta prueba de coloración de muestras, se realiza para detectar la presencia de bacterias en una muestra donde se desee determinar si hay infección.

En estudios bacteriológicos las bacterias se agrupan según su nombre y familia a la cual pertenecen pero también si son bacilos o cocos, que dependiendo de la coloración del Gram, son gram positivos o gram negativos. Cuando luego de todo el proceso de coloración la bacteria quedan teñidas de azul violeta son bacterias Gram positivas, si quedan coloreadas rosado son bacterias Gram negativo.

Pasos de la tinción del Gram

1. Obtención de la muestra para colocarla sobre lamina portaobjeto para fijarla con alcohol metanol.
2. Colocar el primer colorante Violeta de Genciana por unos minutos
3. Enjuagar con agua, se le aplica lugol para que se le fije el colorante a las bacterias que sean Gram positivas
4. Realizar una decoloración rápida con alcohol acetona, se quita el exceso, quedaran teñidas la que sean Gram positivas.
5. Las que no quedaran decoloradas, se aplica una coloración secundaria con safranina por unos minutos. Así se distinguen mejor las bacterias Gram negativas con una tonalidad rosada
6. Después de este paso se pueden observar al microscopio, diferenciadas las bacterias Gram positivas (Azul violeta) de las Gram  negativas (rosadas.)

Si omitimos el paso de la coloración secundaria, también se puede observar la diferencia entre las bacterias Gram positivas de las Gram negativas, pero en este caso serian incoloras.

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