Question

Menciona 5 métodos de laboratorio utilizados para en el análisis de proteínas. Indique el fundamento químico de cada uno de ellos, su alcance ( extracción, aislamiento, purificación , cuantificación, caracterización, etc) y especifique si es aplicable a proteínas sobles o de membrana).

Answer 1

· Método del Biuret En solución alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace peptídico de las proteínas dando un color purpúreo que se cuantifica espectrofotométricamente (540nm). Como estándar se utiliza una solución de albúmina. Proteína + Cu+2 Complejo Cu-Proteína (púrpura) Muestra: suero o plasma (heparina o EDTA). Separar el suero del coágulo o el plasma de las células antes de 3h. Si el paciente está acostado durante la extracción el resultado será menor.
· Método de Lowry Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra. Consiste en dos reacciones: 1. Reacción de Biuret 2 2. Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de los aminoácidos tirosina y triptófano que, junto con los complejos Cu+2 , reducen el reactivo de Folin generando un color azul. Está sujeto a muchas interferencias. Se utiliza fundamentalmente en orina.
· Turbidimetría Medición de la turbidez resultante de la precipitación de proteínas
· Absorción en el ultravioleta Se mide la absorbancia a 270nm originada fundamentalmente por los anillos aromáticos de triptófano y tirosina.
· Métodos de unión a colorantes NOTA: para semicuantificar la concentración de proteínas en orina se utilizan tiras reactivas.