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La cultura de Guayaquil ha sido expuesta a cambios y transformaciones a través de los años debido a la migración de personas procedentes de distintos lugares de Ecuador y otros países, al continuo crecimiento de la ciudad y su variedad poblacional, y su estatus de eje comercial de la nación. Al ser la ciudad más poblada del Ecuador, varios movimientos culturales. emergieron de la ciudad. A comienzos del siglo XX la literatura ecuatoriana alcanzó su máximo esplendor con varios escritores y poetas guayaquileños, entre los cuales se encuentran aquellos que conformarían el Grupo de Guayaquil. En los años 1950 el guayaquileño Julio Jaramillo se convirtió en uno de los más grandes exponentes de la música ecuatoriana llegando a tener fama internacional y ser conocido como "Ruiseñor de América" por sus destacadas interpretaciones en el género del pasillo.
Murales adornados con pinturas en el centro de la ciudad.
Casas con estilo colonial en el Barrio Las Peñas.
La ciudad de Guayaquil es un importante eje nacional para la música, teatro, cine, danza y arte visual. La ciudad posee una considerable variedad de museos y bibliotecas, aunque existe una casi escasa cantidad de galerías de arte en los sectores marginales. La "Regeneración Urbana" implementada por la municipalidad ha promovido el crecimiento cultural en varias partes de la urbe, como es el caso del Cerro Santa Ana el cual es destino turístico, cultural e histórico. A lo largo del Malecón Simón Bolívar, regenerado y transformado por la fundación Malecón 2000 y el Malecón del Salado también se pueden apreciar esculturas y monumentos que plasman el arte de la ciudad.
Desde el año 2015 con la inauguración del primer Festival Internacional de Cine de Guayaquil, se da impulso a la difusión de la cinematografía local, nacional y del mundo.
Guayaquil comparte muchas características con la cultura de las demás partes de la región litoral del Ecuador. La población de la ciudad y de la mayoría de la costa mantiene diferencias en las características idiomáticas con las ciudades y poblaciones de la serranía ecuatoriana. También se nota la diferencia de vestimentas, ya que al tener la ciudad un clima cálido la mayor parte del año, las ropas utilizadas por la mayor parte de la población es ligera. La gastronomía de Guayaquil también marca la diferencia con las ciudades serranas y se asemeja a la del perfil costanero.
La vida nocturna de la ciudad es muy activa. La mayoría de la población juvenil concurren a sectores de la urbe donde la presencia de clubes, bares, discotecas y otros locales es abundante. El centro de la ciudad está la denominada "Zona Rosa" que aglomera una gran cantidad de establecimientos nocturnos, que mantiene un gran afluencia sobre todo en días de feriado