Question

Estructuras subcelulares, células y tejidos

Answer 1

1.1.3. Técnicas de fragmentación y separación de los componentes de las células1.1.3.1. Fragmentación celular 
    El fraccionamiento subcelular es un conjunto de métodos y técnicas que tienen como objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas en un determinado componente celular, ya sea éste un orgánulo (mitocondrias, núcleos, peroxisomas, etc.) una fracción de membrana (membrana total, plasmática, dominio basolateral, dominio apical, etc.), complejos multiproteicos (citoesqueleto de actina, microtúbulos, poros nucleares, etc.).Fases:Preanalítica: Obtención preparación preliminar de la muestra hasta llegar al laboratorioAnalítica: o de aplicación de procedimientos. Toma y tratamiento de datos, recogida de resultados en un informePostanalítica: Validación técnica del informe analítico.
Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dos etapas :Rotura de las células o tejidos para obtener un lisado celular (o tisular) en el que la fracción deseada se encuentre en condiciones adecuadas para su purificación.Separación de la fracción deseada del resto de componentes de la célula o del tejido mediante algún criterio como puede ser una diferencia de densidad (centrifugación en gradientes o centrifugación diferencial), la presencia de algún antígeno (cromatografía de inmunoafinidad, inmunoprecipitación, etc.).Técnicas de rotura de células y tejidos 
    El primer paso en la purificación de la mayoría de las proteínas y estructuras subcelulares es la rotura de los tejidos o de las células para obtener un lisado celular en el que la proteína, el complejo multiproteico o la estructura subcelular se encuentre en condiciones que permitan su aislamiento. Esto se consigue empleando procedimientos mecánicos suaves conocidos generalmente como homogenización. Estos métodos producen la rotura de las membranas celulares, suavemente, con lo que se libera el contenido celular. 
    Los procedimientos de homogenización más comunes son :        La purificación de cada uno de los principales organelos subcelulares representó un gran logro en la Biología celular al hacer posible el estudio detallado de sus estructuras y funciones metabólicas. 
        La purificación se inicia con la rotura de la pared celular, de la membrana plasmática, o de ambas. Las células deben estar suspendidas en una solución con pH y concentración de sales apropiada. Normalmente se emplea sacarosa isotónica (0,25%) o una combinación de sales similar a las de la célula. 
        El proceso de fraccionamiento consta principalmente de las siguientes