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Buenos Aires prosperaba: su población aumentaba, la economía de la ciudad se transformaba rápidamente y su puerto mantenía una creciente actividad gracias al comercio ultramarino. La élite porteña se decidió a reunir un Congreso de todas las provincias, con el fin de dictar una Constitución Nacional. El Congreso comenzó a sesionar en Buenos Aires en diciembre de 1824 y llegó a importantes cuerdos: la ley llamada Ley Fundamental, sancionada en enero de 1825, reflejaba la voluntad de unidad de las provincias sobre la base del principio de las autonomías provinciales, y establecía que la futura Constitución solo tendría validez cuando todas las provincias dieran su aprobación. Mientras tanto, el nuevo gobernador de Buenos Aires, Juan Gregorio de Las Heras, asumió provisoriamente las funciones de un gobierno nacional.
Sin embargo, pronto reaparecieron los enfrentamientos. El grupo reformista que dominó el Congreso pasó a ser identificado como el de los unitarios, pues proponía la construcción de un poder central fuerte y era contrario a las autonomías provinciales. Además, la marcha del Congreso se alteró por el estallido de un grave conflicto en la Banda Oriental, que permanecía anexada al Imperio del Brasil desde 1822. En abril de 1825, treinta y tres orientales, a las órdenes de Juan Antonio Lavalleja, salieron de Buenos Aires, sublevaron la campaña oriental contra los brasileños y pusieron sitio a Montevideo. En agosto, los rebeldes declararon la anexión de la Banda Oriental a las Provincias Unidas. Por su parte, el Congreso, reunido en Buenos Aires, aceptó la reincorporación de la provincia oriental y el Brasil le declaró la guerra.
Esta emergencia fue aprovechada por el grupo unitario para acelerar sus planes: el Congreso dispuso la organización de un ejército nacional; más tarde sancionó una ley que creaba un Poder Ejecutivo Nacional a cargo de un Presidente de las Provincias Unidas del Río de la Plata para lo cual fue designado Bernardino Rivadavia, en febrero de 1826. Pese a la guerra, los planes reformistas no se detuvieron y el gobierno hizo declarar a la ciudad de Buenos Aires como capital de la República; la provincia de Buenos Aires se quedó sin la ciudad, el puerto y su aduana, que pasaron a ser controlados por el gobierno central. Ello provocó una fuerte oposición porteña que se amplió cuando el gobierno decidió dividir el reste de Buero res en dos provincias diferentes.
El gobernador Las Heras renunció y los ganaderos que como Juan Manuel de Rosas reclamaban la autonomía e integridad de la provincia, se unieron en contra de Rivadavia. De esta forma, creció el apoyo a la oposición federal porteña encabezada por Manuel Dorrego. En 1826, el Congreso aprobó una nueva Constitución pero la mayoría de las provincias la rechazaron por su centralismo. Se inició, así, un nuevo ciclo de la guerra civil: Quiroga líder del federalismo del Interior, extendió su autoridad sobre las regiones del Noroeste y Cuyo.
Rivadavia debió afrontar al mismo tiempo una guerra civil y otra con el Brasil, y ello lo decidió a buscar la paz con el Imperio, pues necesitaba al ejército para controlar a las provincias. Su embajador, Manuel José García acordó un tratado que establecía la incorporación de la Banda Oriental como provincia del Brasil, lo cual concitó un rechazo general. Rivadavia debió renunciar en junio de 1827. La experiencia de unificación nacional quedó clausurada.
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