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El 1º de mayo de 1865, Francisco Octaviano de Almeida Rosa -reemplazante de Paranhos e integrante del partido liberal brasileño-, Carlos de Castro -canciller del gobierno de Venancio Flores- y Rufino de Elizalde -canciller del de Mitre- firmaron en Buenos Aires el tratado de alianza que permanecería secreto debido a sus comprometedoras cláusulas.
Los aliados se comprometían a respetar la independencia, soberanía e integridad del Paraguay. Los objetivos de guerra establecidos eran los siguientes: por el artículo 11º, quitarle a Paraguay la soberanía de sus ríos; por el 14º, responsabilizar a Paraguay de la deuda de guerra; y por el 16º, repartir el territorio en litigio o exclusivamente paraguayo entre la Argentina y Brasil. Mitre tomaría el Chaco paraguayo hasta la Bahía Negra y el Imperio el área fronteriza hasta el río Apa por el lado del río Paraguay y hasta el Igurey por el Paraná. Por el artículo 3º la dirección de los ejércitos aliados quedaba a cargo de Mitre, tal como se lo había prometido Paranhos en octubre de 1864, y por los artículos 6º y 7º, la guerra no se detendría hasta la caída de López . Esta se hacía contra el presidente y no contra el pueblo paraguayo, cuyos miembros eran admitidos por los aliados para incorporarse a una Legión Paraguaya que luchase contra la "tiranía" de López. (1)
Se firmó también un protocolo adicional, también secreto, que establecía lo siguiente: 1) demolición de las fortificaciones de Humaitá; 2) desarme de Paraguay y reparto de armas y elementos de guerra entre los aliados; y 3) reparto de trofeos y botín que se obtuvieran en territorio paraguayo. (2)
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