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Respuesta:
Materiales y métodos
Preparación de sustrato para la fermentación sumergida de ácido cítrico
Como sustrato para la fermentación se utilizó jarabe de sacarosa de caña a una concentración de 250 g/lt decationizado a través de una resina catiónica Ref. Lewatit Mono Plus S100 de Lanxess. La solución azucarada se esterilizó en autoclave a 120 °C y 15 psig por 5 minutos.
Preparación del inóculo
Se utilizaron esporas de la cepa de Aspergillus niger obtenida por mutación con luz ultravioleta Lámpara UVG-54 de 254nm (Ikram-Ul et al., 2004) y seleccionada por su alta producción de ácido cítrico. La cepa se mantuvo en silica gel y se cultivó en agar Sabouraud por un periodo de 7 días a 30 °C. Posteriormente, las suspensiones de esporas se prepararon adicionando 10 ml de agua destilada estéril al cultivo puro y se dispersaron con la ayuda de un asa de inoculación. Las esporas se cuantificaron en un contador de partículas automático HIAC 8000 previa agitación vigorosa. A partir de los recuentos obtenidos, se prepararon suspensiones con una concentración de 107 esporas/ml.
Condiciones y medio de producción
Las fermentaciones de ácido cítrico se llevaron a cabo en frascos agitados de 250 ml con bafles que contenian 30 ml de medio de cultivo el cual, además de incluir 250 g/lt de sacarosa como fuente de carbono, se suplementó con micronutrientes (Cu, Zn, Fe), macronutrientes (Mg, K, P), urea y sulfato de amonio como fuente de nitrógeno (Shu et al., 1948) (Darouneh et al., 2009) (Dhillon et al., 2011). El pH inicial del medio se ajustó a un valor 3.0. Las fermentaciones se inocularon con una suspensión de esporas equivalente a 1% del volumen total. Posteriormente, se incubaron en agitación continua en un equipo orbital marca New Brunswick Scientific a 225 r.p.m. ubicado en un cuarto con temperatura (34.5 +/- 0.5 °C) y humedad relativa (60 - 70%) controlada. Las fermentaciones se corrieron durante 143 h. Los tratamientos evaluados aparecen en el Cuadro 1.
Explicación: